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平衡透析法測定血漿蛋白結合率原理及裝置

更新時間:2021-06-17      點擊次數:3102

藥物血漿蛋白結合率(plasma protein binding, PPB)是藥物在動物體內重要的藥理學參數之一,影響著藥物體內游離濃度進而影響藥物的處置過程。藥物在進入血液后與血漿蛋白會有不同程度結合,血液中游離藥物的比例會影響其在體內吸收、分布、代謝和排泄的過程,與血漿蛋白結合的藥物可能會有更長的半衰期和清除速率,因此測定血漿蛋白結合率對于理解化合物的活性以及組織分布有很重要的參考意義。
1 結合蛋白類型
血漿蛋白主要作為載體負責各類外源性和內源性分子在循環系統內的轉運。其中參與小分子藥物結合的主要有白蛋白、α-1-酸性糖蛋白(AAG)、球蛋白和脂蛋白,主要以白蛋白和AAG為主。藥物與蛋白的結合強弱主要與藥物-蛋白親和力、蛋白豐度相關。


2 血漿蛋白結合率常用測定方法
目前常用于PPB測定的方法主要包括平衡透析法(equilibrium dialysis),超濾法(utrafiltration method),超速離心法(ultracentrifugation method),凝膠過濾法(gel filtration)等。 其中,平衡透析法是基于藥物結合的平衡原理來測定藥物游離濃度的方法,也是研究藥物血漿蛋白結合率的經典方法。

平衡透析法
常用種屬:大鼠,小鼠,犬,猴,人
分析方法:LC-MS/MS

各種藥物以一定的比率與血漿蛋白結合之后,在血漿中會同時存在結合型與游離型兩種類型,游離性藥物具有藥物活性。藥物與血漿蛋白結合會成為結合型藥物,暫時失去藥理活性,并且儲存于血液中,起到藥庫的作用,對于藥物作用及其維持時間長短具有重要的意義。一般蛋白結合率高的藥物體內消除慢,作用維持時間長,藥效平穩。結合率低的藥物體內消除快,同時作用時間短,藥效有很大的波動。

平衡透析法測定血漿蛋白結合率是用透析膜將蛋白質溶液與緩沖液分隔開,建立在兩者之間的一種平衡狀態,只有分子量小的藥物小分子可以通過。透析的動力是擴散壓,擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度與膜的厚度、透析的小分子溶質在膜兩邊的濃度梯度及透析溫度等因素有關。平衡透析法能夠直接測出為與蛋白結合的藥物小分子的數量,這是分析蛋白與小分子物質結合的關鍵,從而能夠求出結合位點數及結合常數。

如圖所示,利用半透膜將左右兩室進行分隔,左側加入含藥的蛋白溶液,右側加入空白緩沖液,未被結合的游離藥物可以自由穿過半透膜,孵育一定時間后兩側達到平衡,游離藥物濃度相等,通過測定兩側藥物濃度即可計算得到血漿蛋白結合率。

平衡透析法在測定藥物血漿蛋白結合率具有操作簡單、溫度易于控制、PH值可調、設備成本低廉等優點。但是同時存在達成平衡時間較長、溶液體積會變化,且透析時間過長可能會造成由加熱或代謝引起的被測物質的降解等缺點。因此在利用平衡透析法測定藥物血漿蛋白結合率,或者藥物與蛋白質相互作用時需要與其他的一些方法聯用,才能獲得更準確的作用信息。一般只有血漿蛋白結合率高,分布容積小,消除慢以及治療指數低的藥物在臨床上的這種相互作用才有意義。

3 血漿蛋白結合平衡透析裝置
    匯智泰康針對血漿蛋白結合率測定試驗研發針對性的平衡透析裝置,基于平衡透析法的原理而設計96孔平衡透析裝置,可用于血漿蛋白結合率的測定。該裝置能夠減少非特異性的透析設備表面的藥物吸附,縮短平衡時間,提高樣品分析的通量。透析膜(半透膜)選用高分子膜,孔徑可根據客戶需求定制。

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